概念:化學發(fā)光標記免疫分析,別稱:化學發(fā)光免疫分析(CLIA ) ,是用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析儀器。
化學發(fā)光免疫分析儀包含兩個部分, 即免疫反應系統(tǒng)和化學發(fā)光分析系統(tǒng)。
原理:利用化學發(fā)光物質經(jīng)催化劑的催化和氧化劑的氧化, 形成一個激發(fā)態(tài)的中間體, 當這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時,同時發(fā)射出光子(hM) , 利用發(fā)光信號測量儀器測量光量子產(chǎn)額。免疫反應系統(tǒng)是將發(fā)光物質(在反應劑激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體)直接標記在抗原(化學發(fā)光免疫分析) 或抗體(免疫化學發(fā)光分析) 上, 或酶作用于發(fā)光底物。
化學發(fā)光免疫分析儀器中核心探測器件為光電倍增管(PMT),由單光子檢測并傳輸至放大器,并加高壓電流放大,放大器將模擬電流轉化為數(shù)字電流,數(shù)字電流將發(fā)光信號由R232數(shù)據(jù)線傳輸給電腦并加以計算,得出臨床結果。
化學發(fā)光標記免疫分析法
化學發(fā)光標記免疫分析又稱化學發(fā)光免疫分析(CLIA ) ,是用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發(fā)光物質有吖啶酯類化合物——acridinium ester (AE) ,是有效的發(fā)光標記物 , 其通過起動發(fā)光試劑作用而發(fā)光, 強烈的直接發(fā)光在一秒鐘內完成,為快速的閃爍發(fā)光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析, 其化學反應簡單、快速、無須催化劑; 檢測小分子抗原采用競爭法 ,大分子抗原則采用夾心法 , 非特異性結合少, 本底低; 與大分子的結合不會減小所產(chǎn)生的光量, 從而增加靈敏度。
發(fā)光酶免疫分析法
從標記免疫分析角度, 化學發(fā)光酶免疫分析( chemi luminescent enzyme immuno assay, CLEIA ) , 應屬酶免疫分析, 只是酶反應的底物是發(fā)光劑,操作步驟與酶免分析完全相同: 以酶標記生物活性物質(如酶標記的抗原或抗體) 進行免疫反應,免疫反應復合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號試劑作用下發(fā)光, 用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷酸酶(ALP) ,它們有各自的發(fā)光底物。
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